Echantillons conditionnés déshydratés

La méthode BOS

Cette méthode a été mise au point par le virologue hollandais BOS en 1979. C’est une technique très simple de déshydratation et de conservation des organes végétaux en vue de réaliser des analyses virologiques ultérieurement. Principalement utilisée pour les feuilles, la technique peut aussi s’appliquer à des organes non lignifiés : épiderme de fruit, écorce de jeunes pousses d’arbres fruitiers.

Les études réalisées ont montré que la plupart des familles de virus pouvaient se conserver par cette méthode et qu’au bout de 20 ans il était toujours possible de détecter le virus. 

Sur des échantillons ainsi conservés, la plupart des techniques pour le diagnostic et la détection des virus peuvent être mises en oeuvre : Indexage biologique sur une gamme de plantes hôtes (que certains virus), sérologie (ELISA), biologie moléculaire (PCR). Toutefois les observations par microscopique électronique à transmission ne sont pas possibles sur ces échantillons.

Les étapes :

• Au terrain :
  • Pour du diagnostic, prélever des feuilles présentant des symptômes.
  • Pour de la surveillance sans symptôme visible, prélever selon le protocole de prélèvement défini dans le plan de surveillance ou de contrôle.
  • Enrouler, sans les tasses, les feuilles prélevées (2 ou 3 trois folioles ou fragments de feuilles) dans du papier absorbant (à la manière d’un « bonbon »).
  • Mettre le tout dans une petite boîte qui ferme hermétiquement (par exemple boîte de pellicule photo, tube à hémolyse, tube Falcon…).
  • Remplir la boite au tiers du volume avec du chlorure de calcium anhydre (CaCl2) ou du carbonate de calcium (CaCO3).
  • Conserver la boîte bien fermée à température ambiante ou de préférence à environ 4 °C.
  • Au bout de 5 à 7 jours l’échantillon est déshydraté et peut être expédié en envoi simple vers un laboratoire.

• Au laboratoire :
  • Peser les échantillons à mettre en « BOS » de manière à avoir le poids requis pour la méthode d’analyse demandée (exemple : 1gr pour un test ELISA, 0.1 gr pour une RT-PCR…).

Référence bibliographique :

BOS, L, 1979. Persistence of infectivity of three viruses in plant material dried over CaCl2 and stored under different conditions. European Journal of Plant Pathology, 217-220.